Dogs naturally infected by Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, and Ehrlichia canis in São Paulo, Brazil / Cães naturalmente infectados por Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, e Ehrlichia canis em São Paulo, Brasil

Several agents can cause hemoparasitic diseases in dogs, and blood-sucking arthropods transmit these diseases. These agents can cause several clinical manifestations and, in some cases, can kill the host. Because these agents are essential in animal health, this study aims to detect the frequency of Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, and Rangelia vitalii by real-time PCR and Babesia vogeli in dogs in the southern region of the city of São Paulo, São Paulo. Of the 98 dog samples, 18 (18.4%) tested positive with real-time polymerase chain reaction for at least one studied agent. Of these 18 samples, 17 tested positive for a single agent (11.2% for B. canis vogeli, 1.02% for R. vitalii, and 5.1% for E. canis), and one showed co-infection with B. canis vogeli and R. vitalii. The results demonstrate the presence of hemoparasites in the studied animals, which can influence the quality and life expectancy of these animals. The Rangeliadetection warns small animal clinicians to include it as a differential diagnosis for hemoparasitosis.(AU)

As hemoparasitoses em cães podem ser causadas por diversos agentes, sendo essas doenças transmitidas por artrópodes hematófagos. Esses agentes podem causar diversas manifestações clínicas e, em alguns casos, podem matar o hospedeiro. Este estudo teve como objetivo detectar por PCR em tempo real a frequência de Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, Rangelia vitalii e Babesia canis vogeli em amostras de cães da zona sul da cidade de São Paulo, Brasil. Das 98 amostras de cães, 18 (18,4%) testaram positivo com reação em cadeia da polimerase em tempo real para pelo menos um agente estudado. Destas 18 amostras, 17 testaram positivo para um único agente (11,2% para B. canis vogeli, 1,02% para R. vitalii e 5,1% para E. canis), e uma apresentou coinfecção com B. canis vogeli e R. vitalii. Os resultados demonstram a presença de hemoparasitas nos animais estudados, o que pode influenciar a qualidade e a expectativa de vida desses animais. Além disso, é o primeiro relato da detecção de R. vitalli na zona sul de São Paulo e serve de alerta para os clínicos de pequenos animais incluírem esse agente como diagnóstico diferencial para as hemoparasitoses.(AU)

Mannheimia varigena as the etiologic agent of lameness and coronary band lesion in cattle / Mannheimia varigena como agente etiológico de claudicação e lesão na banda coronária em bovinos

Mannheimia varigena was identified as the etiologic agent of lameness and coronary band lesion in 30% of cattle in a farm located in Rio Grande do Sul, Brazil. Swab samples from the lesions were cultured in McConkey Agar and Blood Agar for microbiological identification. Culture growth was submitted to Gram staining and Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) identification. Antimicrobial susceptibility test based on disc diffusion was performed for three antibiotics: ceftiofur, gentamicin and florfenicol. Furthermore, molecular characterization of 16S rDNA gene sequencing was performed and the data was used in a phylogenetic analysis. For that purpose, total DNA was extracted by thermo extraction directly from the bacterial colonies and the polymerase chain reaction (PCR) was performed. Gram-negative Mannheimia varigena strain LBV010/22 was identified as the causative of the lesions. The strain was susceptible to all antibiotics tested. The phylogenetic analysis demonstrated that the analyzed strain is closely related to M. varigena strains from pyelonephritis and respiratory tract. Overall, this is the first report of M. varigena as the causative agent of coronary band injury in bovine. Therefore, our findings show the importance of an accurate microbiological identification of infectious agent in lameness cases in order to prevent the occurrence and perform an appropriate treatment in the future.

Mannheimia varigena foi identificada como agente etiológico de claudicação e lesão de banda coronária em 30% dos bovinos de uma fazenda localizada no Rio Grande do Sul, Brasil. Amostras de swab das lesões foram cultivadas em Ágar McConkey e Ágar Sangue para identificação microbiológica. O crescimento da cultura foi submetido à coloração de Gram e identificação por Espectrometria de Massa de Ionização por Dessorção a Laser Assistida por Matriz (MALDI-TOF MS). O teste de suscetibilidade antimicrobiana baseado na difusão em disco foi realizado para três antibióticos: ceftiofur, gentamicina e florfenicol. Além disso, foi realizada a caracterização molecular do sequenciamento do gene 16S rDNA e o resultado utilizado para análise filogenética. Para tanto, o DNA total foi extraído por termoextração diretamente das colônias bacterianas e uma reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada. Foi identificada como causadora das lesões a cepa gram-negativa de Mannheimia varigenaLBV010/22. Ela foi suscetível a todos os antibióticos testados. A análise filogenética demonstrou que a cepa analisada está intimamente relacionada às M. varigena presentes em pielonefrite e no trato respiratório. No geral, este é o primeiro relato de M. varigenacomo agente causador de lesão de banda coronária em bovinos. Portanto, nossos achados mostram a importância de uma identificação microbiológica precisa do agente infeccioso nos casos de claudicação, a fim de prevenir a ocorrência e realizar um tratamento adequado no futuro.

Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Mycoplasma spp. em gatos domésticos / Epidemiological aspects of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Mycoplasma spp. in domestic cats

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys., e Mycoplasma spp., torna-se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de gatos advindos de consultas no Hospital Veterinário Mário Dias Teixeira (HOVET) que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de gatos domésticos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais e grupos etários. De todos os animais testados, 34,7% obtiveram diagnóstico positivo para uma das enfermidades, sendo o gênero Mycoplasma spp. o que mais prevaleceu em amostras positivas, com maior frequência em fêmeas adultas, bem como foi descrita ocorrência de E. canis apenas nesse sexo, já A. platysfoi descrito com maior frequência em machos, além de achados de infecções concomitantes observado entre os agentes Anaplasmae Mycoplasma. Concluímos que os gatos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

Hemoparasitosis have become increasingly important in the small animals' internal medicine. Among the causal agents, there are Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys. and Mycoplasma spp., which give the understanding of the epidemiology in domestic cats a great significance. This research aimed to make a retrospective survey of records from cats that came from appointments at the Veterinary Hospital Mário Dias Teixeira (HOVET) and underwent the Polymerase Chain Reaction (PCR) test at the molecular biology laboratory, at the Amazônia Federal Rural University (UFRA), in the years of 2018 and 2019. In total, 72 samples of domestic cats were processed, from which 33 were males and 39 females, 70 of them were mongrel cats and 2 siamese, all of them showed thrombocytopenia amongst other clinical signs that led them to need a veterinary appointment, the months of admission, processing of the samples, districts the animals came from and age group were categorized. 34,7% of all the animals tested showed positive results for one of the diseases, with the genus Mycoplasma spp. being the most prevalent in positive samples, showing a higher rate in adult females, as the occurrence of E. canis was reported only in females, while A. platys was reported with a higher rate in males, as well as concomitant infections following the observation of the agents Anaplasma and Mycoplasma. In conclusion, the cats admitted at HOVET showed parasitism by different infectious agents.

Detecção do vírus da imunodeficiência felina em gatos domésticos (Felis catus) pela técnica de reação em cadeia da polimerase / Detection of feline immunodeficiency virus in domestic cats (Felis catus) by polymerase chain reaction technique

O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de DNA do Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) em gatos domesticos (Feliz catus) assintomáticos. Foi realizada a tecnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em 50 animais. Para tal, foram coletadas amostras de sangue, por venopunção da jugular, de forma asséptica para armazenamento de 1-2 mL de sangue total. Os animais que participaram do estudo fizeram parte do projeto de castração "Vida digna" da Universidade Federal Rural da Amazônia. E a escolha dos animais foi realizada de maneira aleatória, sem distinção por sexo ou idade, resultando em 29 foram fêmeas e 21 machos. Para o diagnóstico, foi realizada a extração do DNA, em seguida as amostras foram testadas em duas reações de PCR utilizando- se dois conjuntos de primers do Gene gag de FIV. Achou-se uma prevalência de 2% (1/50), confirmando assim a presença do vírus na cidade de Belém. Assim, evidenciando a importância de testar os felinos mesmo sendo assintomáticos. Desta forma, faz-se necessário a realização de trabalhos futuros que amplie o número amostral dos animais testados para assim elucidar o perfil epidemiológico da doença na região de Belém do Pará, considerando a relevância clínica desta infecção e a correta conduta médica veterinária para evitar novas infecções.

The objective of this work was to detect the presence of Feline Immunodeficiency Virus (FIV) proviral DNA in asymptomatic domestic cats (Feliz catus). The polymerase chain reaction technique was performed from 50 animals. For this, blood samples were collected by jugular venipuncture, aseptically for storage of 1-2 mL of whole blood. The animals that participated in the study were part of the castration project "Vida digna" at the Universidade Federal Rural da Amazônia. And the choice of animals was performed randomly, without distinction by sex or age, resulting in 29 females and 21 males. For diagnosis, DNA extraction was performed, then the samples were tested in two PCR reactions using two sets of FIV gag gene primers. A prevalence of 2% (1/50) was observed, thus confirming the presence of the virus in the city of Belém. Thus, highlighting the importance of testing the felines even if they are asymptomatic. Therefore, it is necessary to carry out future work that expands the sample number of animals tested in order to elucidate the epidemiological profile of the disease in the region of Belém do Pará, considering the clinical relevance of this infection and the correct veterinary medical conduct to avoid new infections.

Outbreak of bovine tick-borne disease on a riverside property in the Western Amazonia: Case report / Surto de tristeza parasitária bovina em propriedade ribeirinha na Amazônia Ocidental: Relato de caso

The objective was to report an outbreak of tick-borne disease (TBD) on riverside property in the Western Amazon. The death of 25 Nellore cattle was reported on a rural property on the banks of the Purus River, state of Acre. The producer observed animals with staggering walking, drop in productivity, weight loss and evolution to death in approximately 30 days. Fifteen animals from the same batch were selected for clinical evaluation and the ear tip was punctured for hemoparasite research, in addition to blood collection for hematological, biochemical and molecular evaluation. The main laboratory findings were leukocytosis, thrombocytopenia, hypoproteinemia, elevated creatine kinase and reduced urea, creatinine and albumin, as well as visualization of forms suggestive of Anaplasma spp. in 13.33% of the samples. Through PCR, 20% positivity was observed for Anaplasmamarginale and 53.33% for Babesia sp. Hematological and biochemical changes, although highly suggestive, may suffer changes from other factors not related to TBD. Therefore, the presumptive identification of the etiological agent in the blood or confirmatory by molecular methods is essential in the diagnosis. Depending on the stage of the disease, low parasitemia occurs, making it difficult to see hemoparasites in blood smears. The Babesia sp. was the main agent of the outbreak of TBD in the population evaluated, which, when associated with early clinical and laboratory diagnosis, results in adequate therapeutic direction and prophylactic measures, promoting a balance between host, agent and vector.

Objetivou-se relatar um surto de tristeza parasitária bovina (TPB) em propriedade ribeirinha na Amazônia Ocidental. Foi notificado o óbito de 25 bovinos da raça Nelore, em uma propriedade rural às margens do rio Purus, estado do Acre. O produtor observou animais com andar cambaleante, queda na produtividade, perda de peso e evolução ao óbito em aproximadamente 30 dias. Quinze animais do mesmo lote foram selecionados para avaliação clínica e foi procedida a punção a ponta de orelha para pesquisa de hemoparasitos, além da coleta de sangue para avaliação hematológica, bioquímica e molecular. Os principais achados laboratoriais foram anemia, leucocitose, trombocitopenia, hipoproteinemia, elevação da creatina quinase e redução de ureia, creatinina e albumina, além da visualização de formas sugestivas de Anaplasma spp. em 13,33% das amostras. Por meio da PCR, foi observado 20% de positividade para Anaplasma marginale e 53,33% para Babesia sp. As alterações hematológicas e bioquímicas, embora bastante sugestivas, podem sofrer alterações de outros fatores não relacionados à TPB. Por isso, a identificação presuntiva do agente etiológico no sangue ou confirmatória por métodos moleculares é essencial no diagnóstico. A depender da fase da doença, ocorre baixa parasitemia, dificultando a visualização de hemoparasitos em esfregaços sanguíneos. A Babesia sp. foi o principal agente do surto de TPB na população avaliada, que, quando associado ao diagnóstico clínico e laboratorial precoce, resulta no direcionamento terapêutico adequado e medidas profiláticas, promovendo uma relação de equilíbrio entre hospedeiro, agente e vetor.

Effect of parity segregation on Mycoplasma hyopneumoniae infection dynamics and pneumonic lesions in pigs / Efeito da ordem de parto segregada sobre a dinâmica de infecção de Mycoplasma hyopneumoniae e lesões pulmonares ao abate

Gilts represent a group risk for Mycoplasma hyopneumoniae vertical transmission in swine herds. Therefore, parity segregation can be an alternative to control M. hyopneumoniae infections. The study evaluated the effect of parity segregation on M. hyopneumoniae infection dynamics and occurrence and severity of lung lesions at slaughter. For that, three multiple site herds were included in the study. Herd A consisted of the farm where gilts would have their first farrowing (parity order (PO) 1). After the first farrowing PO 1 sows were transferred to herd B (PO2-6). Herd C was a conventional herd with gilt replacement (PO1-6). Piglets born in each herd were raised in separated nursery and finishing units. Sows (n = 33 (A), 37 (B), 34 (C)) in all herds were sampled prior to farrowing and piglets (n = 54 (A), 71 (B), 66 (C)) were sampled longitudinally at 21, 63, 100, 140 days of age and at slaughter for M. hyopneumoniae detection by PCR and lung lesions scoring. M. hyopneumoniae prevalence in sows did not differ among herds. Prevalence of positive piglets was higher at weaning in the PO1 herd (A) (P < 0.05). However, prevalence of positive pigs from 100 days of age to slaughter age was higher in the PO2-6 herd (B) (P < 0.05). Lung lesion occurrence and severity were higher in herd B. The authors suggested that the lack of a proper gilt acclimation might have influenced the results, leading to sows being detected positive at farrowing, regardless of the parity.

As leitoas consistem em um grupo de risco na transmissão vertical de Mycoplasma hyopneumoniae dentro do sistema de produção de suínos. Dessa forma, a segregação de partos poderia ser utilizada como alternativa para controlar as infecções por M. hyopneumoniae. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da segregação de partos sobre a dinâmica de infecção de M. hyopneumoniae e a ocorrência e severidade das lesões pulmonares ao abate. Para isso três sistemas de produção de suínos com três sítios cada foram incluídos no estudo. A granja A consistia da unidade onde as leitoas tem o primeiro parto, ou seja, alojava somente de fêmeas de ordem de parto 1 (Granja OP1). Após o primeiro parto as fêmeas OP1 foram transferidas para a granja B (Granja OP2-6), ou seja, consistia de fêmeas de ordem de parto 2 a 6, e a granja C consistiu em uma granja convencional com reposição de leitoas (Granja OP1-6), com fêmeas de ordem de parto 1 a 6. Os leitões nascidos de cada granja foram transferidos e criados em creches e terminações segregadas. As matrizes (n = 33 (A), 37 (B), 34 (C)) de todas as granjas do estudo foram amostradas previamente ao parto e os leitões (n = 54 (A), 71 (B), 66 (C)) foram amostrados longitudinalmente aos 21, 63, 100 e 140 dias de idade e ao abate. Em todos os momentos de coleta, as amostras foram avaliadas por PCR para detecção de M. hyopneumoniae. As lesões pulmonares foram avaliadas e escores de lesão foram atribuídos ao abate. A prevalência de matrizes positivas para M. hyopneumoniae não diferiu entre as granjas (P > 0,05). A prevalência ao desmame foi maior na granja A (OP1) (P < 0,05). No entanto, dos 100 dias de idade até o abate a prevalência de leitões positivos para M. hyopneumoniae foi maior na granja B (OP2-6) (P < 0,05). A ocorrência e severidade de lesões pulmonares foram maiores na granja B. Os autores sugerem que a falta de uma aclimatação adequada das leitoas pode ter influenciado nos resultados, levando à detecção de matrizes positivas ao parto, independente da ordem de parto.

Porcine circovirus 2 and 3 in wild boars in Southern Brazil / Circovírus suíno 2 e 3 em javalis no Sul do Brasil

Porcine circovirus 2 (PCV2) has a considerable economic impact on the pork industry worldwide for more than two decades. In 2016, a new circovirus, porcine circovirus 3 (PCV3), was described; since then, it has been reported to be associated with diseased or even in clinically healthy swine in several countries. Considering the importance of wild boars as reservoirs of swine pathogens and the extensive distribution of these animals in Rio Grande do Sul and throughout the national territory, we searched for PCV2 and PCV3 in twenty-six wild boars coupled with necropsy and histologic examination of the sampled animals. Using PCR, 182 tissue samples were analyzed, including the heart, kidneys, liver, lung, lymph nodes, spleen, and tonsils. PCV2 and PCV3 were detected in 57.7% (15/26) and 15.4% (4/26) of wild boars, respectively. Furthermore, co-infection with PCV2 and PCV3 was detected in one of these animals, with PCV2 or PCV3 DNA detection in multiple organs. Histological examination showed mild to moderate and multifocal lymphoplasmacytic interstitial nephritis distributed randomly throughout the renal cortex, apparently unrelated to PCV2 or PCV3 detection. The wild boar population in Brazil is extensive, indicating the presence of a larger number of swine pathogen hosts. In the present study, more than half of the wild boars harbored PCV2; and although less frequently, PCV3 was also detected. Therefore, free-living wild boars can serve as reservoirs of swine circoviruses in southern Brazil.

O circovírus suíno 2 (PCV2) tem causado impacto econômico na indústria suína em todo o mundo por mais de duas décadas. Em 2016, um novo circovírus foi descrito - circovírus suíno 3 (PCV3) - e desde então tem sido relatado em vários países associado a doenças ou mesmo suínos saudáveis. Diante da importância dos javalis como reservatórios de patógenos suínos, e da ampla distribuição desses animais no Rio Grande do Sul e em todo o território nacional, foi realizada pesquisa de PCV2 e PCV3 em vinte e seis javalis (10 fêmeas e 16 machos). Necropsia e exame histológico foram realizados. Utilizando PCR, foram analisadas 182 amostras de tecidos incluindo: coração, rins, fígado, pulmão, linfonodos, baço e tonsila. PCV2 e PCV3 foram detectados por PCR em 57,7% (15/26) e 15,4% (4/26) dos javalis, respectivamente. Um destes animais estava co-infectado por PCV2 e PCV3. O DNA do PCV2 ou PCV3 foi detectado em multiplos órgãos. No exame histológico foi observada nefrite intersticial linfoplasmocitária multifocal leve a moderada, distribuída aleatoriamente pelo córtex renal, aparentemente sem relação com a detecção de DNA viral. A população de javalis no Brasil é extensa, resultando em maior número de hospedeiros para patógenos de suínos. No presente estudo, mais da metade dos javalis capturados abrigavam PCV2 e, embora menos frequente, PCV3 também foi detectado. Os javalis de vida livre podem servir como reservatórios de circovírus suínos no sul do Brasil.

Diagnosis of goat tuberculosis using tuberculinization and molecular techniques

Tuberculosis is an infectious, chronic, and worldwide disease. It has been known since the beginning of humanity and still negatively influences public health and livestock, especially, in Brazil, in the northeast. Etiologic agents are the mycobacteria of the Mycobacterium tuberculosis complex, which is the most important in mammals' involvement. The state of Bahia has 68.7% of its territory located in the semiarid region and holds the largest goat herd in the country. Goat breeding is a social and economic activity that adds value to this region. Up to the present, data on goat tuberculosis is unknown in this state. Thus, this study seeks data on tuberculosis prevalence in goats in a semiarid region of Bahia by using the comparative tuberculin test and multiplex polymerase chain reaction (PCR). A total of 600 adult animals of both sexes were evaluated. A prevalence of 0.33% (2/600) and 33.33% (1/3) properties were found for positive animals. Each assessed property had a questionnaire to analyze the epidemiological data management and relevant aspects for the disease occurrence. To confirm the positive tuberculin test results, PCR was used to detect and identify the pathogenic mycobacteria involved in the infection. It is concluded that most of the properties performing goat breeding in the region show low technification levels and promote farming between different species. Low prevalence of the disease alerts preventive measures to avoid major proportion situations that could influence the goat breeding in the state.

Natural infection and molecular detection of Cytauxzoon felis in a free-ranging Puma concolor in the state of Goiás, Brazil / Infecção natural e detecção molecular de Cytauxzoon felis em Puma concolor de vida livre no estado de Goiás, Brasil

The puma (Puma concolor Linnaeus, 1771), the most widely distributed felid species in the Americas, can be found in all Brazilian biomes. Nevertheless, few studies have focused on hemoparasites in this species. Cytauxzoon felis, a hemoparasite that can infect domestic cats, has also been described in wild felids in Brazil. To the best of our knowledge, this study is the first to diagnose the natural infection and molecular detection of C. felis in a P. concolor in the state of Goiás. This animal presented non-regenerative anemia and inclusion suggestive of piroplasmids within red blood cells. The amplified 551 bp fragment of partial Piroplasmida 18S rRNA gene sequence was 100% identical to corresponding sequences of C. felis available in GenBank. No specific treatment for cytauxzoonosis was administered, and after rehabilitation, the animal was reintroduced into the wild. This finding provides some evidence that P. concolor may act as a natural host of the parasite. The epidemiology, vector and pathogenicity of this hemoparasite in wild and domestic cats in Brazil deserves further investigation.

O puma (Puma concolor Linnaeus, 1771) tem a maior distribuição entre os felídeos das Américas e é encontrado em todos os biomas do Brasil. No entanto, poucos estudos têm se concentrado nos hemoparasitos nesta espécie. Cytauxzoon felis, um hemoparasito que pode infectar gatos domésticos, também foi descrito em felídeos selvagens no Brasil. A saber, este estudo é o primeiro diagnóstico de infecção natural e detecção molecular de C. felis em um P. concolor do estado de Goiás. Este animal apresentou anemia arregenerativa e inclusão de piroplasmídeos nos glóbulos vermelhos. A amplificação do fragmento de 551 pb da sequência parcial do gene Piroplasmorida 18S rRNA foi 100% idêntica a sequências correspondentes de C. felis disponíveis no GenBank. Nenhum tratamento específico para citauxzoonose foi administrado e, após a reabilitação, o animal foi reintroduzido na natureza. Essa descoberta fornece algumas evidências de que P. concolor pode atuar como um hospedeiro natural do parasito. A epidemiologia, vetor e patogenicidade deste hemoparasito em gatos selvagens e domésticos no Brasil merecem uma investigação mais aprofundada.

Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae) in the host Anaphes nitens (Hymenoptera: Mymaridae): first report of association with insects / Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae) no hospedeiro Anaphes nitens (Hymenoptera: Mymaridae): primeiro relato de associação com insetos

Endosymbiont bacteria can affect biological parameters and reduce the effectiveness of natural enemies in controlling the target insect. The objective of this work was to identify endosymbiont bacteria in Anaphes nitens (Girault, 1928) (Hymenoptera: Mymaridae), the main natural enemy used to manage Gonipterus platensis (Marelli, 1926) (Coleoptera: Curculionidae). Genomic DNA from six A. nitens populations was extracted and polymerase chain reactions (PCR) were performed with the primers to detect endosymbiont bacteria in this insect. The PCR products were amplified, sequenced, and compared with sequences deposited in the GenBank for the bacteria identification. All A. nitens populations had the bacterium Yersinia massiliensis (Enterobacteriales:Enterobacteriaceae). This bacterium was originally described as free-living, and it is associated with and composes part of the A. nitens microbiota. This is the first report of Y. massiliensis in an insect host.

As bactérias endossimbiontes podem afetar os parâmetros biológicos e reduzirem a eficácia de inimigos naturais no controle do inseto alvo. O objetivo deste trabalho foi identificar bactérias endossimbiontes em Anaphes nitens (Girault, 1928) (Hymenoptera: Mymaridae), o principal inimigo natural usado no manejo de Gonipterus platensis (Marelli, 1926) (Coleoptera: Curculionidae). O DNA genômico de seis populações de A. nitens foi extraído e as reações em cadeia da polimerase (PCR) realizadas com os primers para detectar bactérias endossimbiontes neste inseto. Os produtos de PCR foram amplificados, sequenciados e comparados com as sequências depositadas no GenBank para identificação das bactérias. Todas as populações de A. nitens tinham a bactéria Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae). Esta bactéria foi originalmente descrita como de vida livre e está associada e compõe parte da microbiota de A. nitens. Este é o primeiro relato de Y. massiliensis em um hospedeiro.

First case of canine visceral leishmaniasis in the midwestern of Santa Catarina State, Brazil / Primeiros casos de leishmaniose visceral canina no Meio-oeste do Estado de Santa Catarina, Brasil

Canine visceral leishmaniasis (CVL) caused by Leishmania (Leishmania) infantum is transmitted by phlebotomine sandflies and a major zoonotic disease in Brazil. Due to the southward expansion of the disease within the country and the central role of dogs as urban reservoirs of the parasite, we have investigated the occurrence of CVL in two municipalities Erval Velho and Herval d'Oeste in the Midwest region of Santa Catarina state. Peripheral blood samples from 126 dogs were collected in both cities and tested for anti-L. infantum antibodies by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence reaction (IIF) and for the presence of parasite DNA by polymerase chain reaction (PCR) in peripheral blood. From examined dogs, 35.71% (45/126) were positive for at least one of the three tests and two (1.6%) were positive in all performed tests. Twelve dogs (9.5%) were positive for both ELISA and IIF, while 21 dogs were exclusively positive for ELISA (16.7%), and 15 (11.9%) for IIF. L. infantum k-DNA was detected by PCR in 9 out of 126 dogs (7.1%) and clinical symptoms compatible with CVL were observed for 6 dogs. Taken together, these results indicate the transmission of CVL in this region, highlighting the needs for epidemiological surveillance and implementation of control measures for CVL transmission in this region.

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) causada pela Leishmania (Leishmania) infantum e transmitida por flebotomíneos e é uma das principais zoonoses do Brasil que se encontra em expansão em estados da região sul do país, sendo os cães o principal reservatório urbano do parasito. O presente estudo investigou a ocorrência de LVC em dois municípios, Erval Velho e Herval d’Oeste localizados no meio-oeste de Santa Catarina. Para tanto, amostras de sangue periférico de 126 cães foram coletadas em ambas as cidades e submetidas à detecção de anticorpos anti-L. infantum por meio de testes de ELISA e imunofluorescência indireta (IFI), bem com a detecção de k-DNA pela reação em cadeia de polimerase (PCR). Além disso, também foram observados os sintomas clínicos e as condições ambientais associadas a esses animais. Dos cães examinados, 35,7% (45/126) foram positivos para pelo menos um dos três testes, dois cães (1,6%) foram positivos em todos os três testes, 12 cães (9,5%) foram positivos tanto no ELISA quanto na IFI, enquanto 21 cães (16,7%) foram positivos para ELISA e 15 (11,9%) para o IFI. A amplificação do k-DNA de L. infantum foi positiva em 9 dos 126 cães (7,1%). Entre os cães positivos seis apresentaram um ou mais sintomas clínicos correlacionados com a LVC. Esses resultados confirmaram a ocorrência de LVC na região e destacaram a importância do monitoramento e implementação de medidas de controle para a LVC nessa região.

Investigation of Tritrichomonas foetus in cryopreserved bovine semen by culture and polymerase chain reaction / Pesquisa por Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado mediante isolamento e reação em cadeia da polimerase

Bovine Trichomoniasis (BT) is an infectious disease caused by Tritrichomonas foetus that can be transmitted either sexually or by fomites. In males, the disease is asymptomatic and permanent. T. foetus has been detected in semen samples where it is able to remain viable even when frozen. The objective of this study was to investigate the presence of T. foetus in 27 samples of commercial frozen bovine semen by culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). Samples were thawed in water at 37°C. Part of the samples was inoculated in a test tube containing Diamond's medium and incubated at 35°C. Growth was evaluated every 24 hours via direct examination under a microscope. The other part was placed in an Eppendorf tube and frozen for later molecular analysis. After 10 days of culture, all samples were negative for T. foetus. The Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. PCR results were negative for all samples. In conclusion, bovine semen samples were negative for T. foetus in both diagnostic methods, according to the adopted methodology.(AU)

A tricomonose genital bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo Tritrichomonas foetus, é transmitida por via venérea e fômites contaminados. Em machos a doença é assintomática e permanente. O agente já foi encontrado em amostras de sêmen e é capaz de permanecer viável quando congelado. Este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino comercial congelado, por meio de cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram descongeladas em água a 37ºC; parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliada a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen testado.(AU)

Meningoencephalitis caused by Bovine alphaherpesvirus 5 in Pernambuco, Brazil / [Meningoencefalite causada pelo Bovine alphaherpesvirus 5 em Pernambuco, Brasil]

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)

Morphological and molecular diagnosis of diseases of free-ranging crab-eating foxes (Cerdocyon thous) / [Diagnóstico morfológico e molecular de doenças de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de vida livre]

The aim of this study was to investigate the occurrence of diseases in free-ranging wild canids that were roadkill on highways in the State of Espírito Santo, Brazil. PCR tests were performed for the detection of Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. in the spleen. Morphological evaluation and identification of parasites was performed in the liver and lung. Twenty specimens of C. thous were necropsied at the Animal Pathology Sector of the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Espírito Santo. Tissue samples were processed for histopathological examination and polymerase chain reaction (PCR) analysis. There was no PCR amplification of genomic DNA sequences of Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. using DNA extracted from the spleen as template. Histologically, lesions associated with parasitism by Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. were observed in the liver and lung, respectively. This is the first report of Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. parasitism in C. thous in the state of Espírito Santo, Brazil. Therefore, this study demonstrated parasitism of crab-eating foxes by Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. Importantly, no evidence of infection with Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. was obtained by PCR analysis.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de doenças em canídeos silvestres de vida livre que foram atropelados em rodovias no estado do Espírito Santo, Brasil. Testes de PCR foram realizados para a detecção de Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. no baço. A avaliação morfológica e a identificação de parasitas foram realizadaa no fígado e no pulmão. Vinte espécimes de C. thous foram necropsiados no Setor de Patologia Animal do Hospital Veterinário da Universidade Federal do Espírito Santo. Amostras de tecido foram processadas para exame histopatológico e análise de reação em cadeia da polimerase (PCR). Não houve amplificação por PCR das sequências de DNA genômico de Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. usando-se DNA extraído do baço como modelo. Histologicamente, lesões associadas ao parasitismo por Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. foram observadas no fígado e no pulmão, respectivamente. Este é o primeiro relato de Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. parasitismo em C. thous no estado do Espírito Santo, Brasil. Portanto, este estudo demonstrou parasitismo de cachorro-do-mato por Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. É importante detacar que não há evidências de infecção por Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. por análise de PCR.(AU)

Tick-borne pathogens infecting dogs from a highland swamp area / [Infecção em cães por patógenos transmitidos por carrapatos em uma área de brejo de altitude]

Objetivou-se neste estudo relatar a frequência e a identidade de patógenos transmitidos por carrapatos em cães residentes de uma área caracterizada por brejo de alta altitude. Amostras sanguíneas (n=203) foram coletadas e molecularmente analisadas via PCR (Babesia spp., Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Ehrlichia spp.) e sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, 8,87% (18/203) foram positivas a algum patógeno transmitido por carrapato. Especificamente, 5,42% (11/203) e 3,45% (7/203) foram positivos a Anaplasma platys e Ehrlichia canis, respectivamente. Este estudo fornece, pela primeira vez, evidência científica de infecção de cães por esses patógenos nessa área de alta altitude e reforça o provável papel de R. sanguineus s.l. como vetor de A. platys, principalmente considerando.se que muitos animais positivos eram infestados por essa espécie de carrapato.(AU)

Monitoring of Leptospira in captive turtles by DNA analysis / [Monitoramento de Leptospira em quelônios mantidos em cativeiro pela análise de DNA]

Existem poucos estudos sobre doenças infecciosas em animais silvestres. O objetivo deste estudo foi pesquisar DNA de Leptospira spp. em sangue de tartarugas mantidas em cativeiro, pertencentes ao Bosque Rodrigues Alves (Jardim Zoobotânico da Amazônia). O DNA foi isolado das amostras de sangue coletadas de 148 tartarugas pertencentes a seis espécies diferentes. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada utilizando-se iniciadores específicos para DNA de Leptospira spp. Nenhuma das amostras apresentou resultado positivo para Leptospira spp.(AU)

Risk factors and detection of brucella ovis in naturally infected rams and ewes / Fatores de risco e detecção de brucella ovis em carneiros e ovelhas naturalmente infectados

The objective of this study was to verify the occurrence of ovine brucellosis using Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and Polymerase Chain Reaction (PCR) techniques, as well as to identify the main risk factors associated with infection in sheep flocks belonging to municipalities in the microregion from Teresina, PI, Brazil. A total of 100 urine and blood samples were collected from sheep aged 6 months or older. The urine samples were submitted to conventional PCR and the blood samples were examined by the AGID technique. Of the 100 blood samples, 17 (17%) were reactive to the AGID test. In conventional PCR of 100 urine samples, six (6%) were positive. Risk factors associated to infection by B. ovis included the rearing system (OR=0.19), feed management (OR=0.05), presence of dystotic births (OR=4.50), miscarriages (OR=3.75) and source of water offered to the animals (OR=0.19). Thus, it was concluded that it is possible to detect the occurrence of animals with ovine brucellosis since PCR is a reliable method to confirm infection. Furthermore, there are risk factors associated to infection by B. ovis in the municipalities studied.

Objetivou-se verificar a ocorrência da brucelose ovina através das técnicas de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA) e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), bem como identificar os principais fatores de risco associados à infecção nos rebanhos ovinos pertencentes a municípios da microrregião de Teresina, PI, Brasil. Foram colhidas 100 amostras de urina e de sangue de ovinos com idade superior ou igual a seis meses. As amostras de urina foram submetidas a PCR convencional e as amostras de sangue à técnica de IDGA. Das 100 amostras de sangue 17 (17%) foram reagentes ao teste de IDGA. Já na PCR convencional das 100 amostras de urina, seis (6%) foram positivas. Ressalta-se que três animais foram positivos em ambos os testes. Como fatores associados à infecção por B. ovis, observou-se o tipo de sistema de criação (OR=0,19), o manejo alimentar (OR=0,05), presença de partos distócicos (OR=4,50), abortamentos (OR=3,75) e a fonte de água fornecida aos animais (OR=0,19). Assim, conclui-se que foi possível detectar a ocorrência de animais com brucelose ovina, uma vez que a PCR é um método confirmatório. Além disso, há fatores de risco associados à infecção por B. ovis nos municípios estudados.

Copro-PCR in the detection and confirmation of Toxoplasma gondii oocysts in feces of stray and domiciled cats / Copro-PCR na detecção e confirmação de oocistos de Toxoplasma gondii em fezes de gatos errantes e domiciliados

Abstract Molecular methods such as Copro-PCR stand out in the diagnosis of T. gondii, because they are highly sensitive and specific, and can distinguish T. gondii from other morphologically similar coccids. The purpose was the detection of Toxoplasma gondii copro-prevalence by polymerase chain reaction in 149 fecal samples from stray and domiciled cats, using three distinct markers (B5-B6, 18S and 529bp RE). Oocysts of T. gondii/H. hammondi were detected in 15.4% by parasitology fecal tests (PFT), and 4% of these oocysts were positively identified as T. gondii by Copro-PCR. The presence of T. gondii genetic material was detected in 16.1%, but 12% of the samples that tested positive by Copro-PCR were negative in PFT. Samples with discordant results were subjected to a new Copro-PCR with 18S marker and a 529, and of the 17 samples, 9 contained T. gondii genetic material. A comparison of the PFT and the molecular methods showed the latter was more sensitive, since it detected 22.1% while the PFT detected 15.4%. Demonstrating the high sensitivity and specificity of the Copro-PCR, particularly with the association of primers (k=0.809), but also confirms the importance of using molecular techniques in laboratories, since Copro-PCR was able to detect samples considered negative by PFT.

Resumo Métodos moleculares como a Copro-PCR se destacam no diagnóstico de T. gondii por serem altamente sensíveis e específicos, podendo distinguir T. gondii de outros coccídeos morfologicamente semelhantes. O objetivo foi a detecção da coproprevalência de Toxoplasma gondii por reação em cadeia da polimerase, em 149 amostras fecais de gatos errantes e domiciliados, utilizando-se três marcadores distintos (B5-B6, 18S e 529pb RE). Oocistos de T. gondii/H. hammondi foram detectados em 15,4% pelos exames parasitológicos de fezes (EPF), e 4% desses oocistos foram identificados positivamente como T. gondii pela Copro-PCR. A presença de material genético de T. gondii foi detectada em 16,1%, mas 12% das amostras positivas pelo Copro-PCR foram negativas no EPF. As amostras com resultados discordantes foram submetidas a uma nova Copro-PCR com os marcadores 18S e 529 e, das 17 amostras, 9 continham material genético de T. gondii. A comparação do EPF com os métodos moleculares mostrou que esse último foi mais sensível, pois detectou 22,1%, enquanto o EPF detectou 15,4%. Isso demonstra a alta sensibilidade e especificidade da Copro-PCR, principalmente com a associação de marcadores (k = 0,809); mas também confirma a importância do uso de técnicas moleculares em laboratórios, uma vez que a Copro-PCR foi capaz de detectar amostras consideradas negativas pelo EPF.

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna / Avaliação de metodologia de vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral por detecção molecular em fauna silvestre atropelada

Abstract The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.

Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.

Evaluation of terrestrial gastropods as possible intermediate hosts of Gurltia paralysans in southern Chile / Avaliação de gastrópodes terrestres como possíveis hospedeiros intermediários de Gurltia paralysans no sul do Chile

Abstract Gurltia paralysans is the causal agent of gurltiosis in domestic cats in South America. Although the life cycle of G. paralysans is unknown, it is thought that gastropods could act as intermediate hosts (IHs), as is the case for several nematodes in the Angiostrongylidae family. The aim of this study was to search for G. paralysans larvae in terrestrial gastropods and determine their role in the life cycle of this nematode species. Terrestrial gastropod samples (n=835) were collected in Punucapa, Valdivia, southern Chile, where cases of gurltiosis had been reported before. The samples included species from the families Arionidae, Limacidae, Helicidae and Milacidae. All gastropods were subjected to enzymatic digestion to isolate G. paralysans larvae. Ten percent of the gastropod samples were analyzed using seminested PCR targeting the 28S rRNA gene, while 2.6% were analyzed by histopathological examination. The results indicated the absence of G. paralysans when using any of the three methods. In conclusion, further studies are needed to evaluate specific species of aquatic or native gastropods acting as possible IHs (in this geographic location).

Resumo Gurltia paralysans é o agente etiológico da gurltiose em gatos domésticos na América do Sul. Embora o ciclo biologico de G. paralysans seja desconhecido, provavelmente é indireto com gastrópodes atuando como hospedeiros intermediários (HIs), como no caso de vários nematoides da família Angiostrongylidae. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de larvas de G. paralysans em gastrópodes terrestres para avaliar seu papel no ciclo de vida do parasito. Amostras de gastrópodes terrestres (n = 835) foram coletadas em Punucapa, Valdivia, sul do Chile, onde casos de gurltiose foram relatados anteriormente. As amostras incluíram espécies das famílias Arionidae, Limacidae, Helicidae e Milacidae. Todos os gastrópodes foram submetidos à digestão enzimática para isolar as larvas de G. paralysans. 10% das amostras foram analisadas, utilizando-se seminested PCR para o gen 28S RNAr de G. paralysans, enquanto 2,6% foram analisados ​​por exame histopatológico. Os resultados indicaram ausência de G. paralysans em todos os três métodos. Os dados permitem concluir que são necessários mais estudos para avaliar espécies específicas de gastrópodes aquáticos ou nativos, que atuam como possíveis hospedeiros intermediários nessa localização geográfica.